无患子皂苷粗提物杀虫活性研究

[目的]为无患子皂苷应用于杀虫剂的开发提供理论依据,为开发利用云南省无患子属植物资源提供基础。[方法]通过浸渍法、饲料混药法、无限量取食法提取无患子中的皂苷,再进行对小菜蛾、玉米象、果蝇的室内毒力测定。[结果]无患子粗提取物皂苷对玉米象没有活性,对小菜蛾和果蝇有毒杀活性,但对果蝇的毒力较高,浓度为50.000mg/ml时,72h果蝇的死亡率为100%,72h对果蝇的LC为4.06mg/ml,浓度为25.000mg/ml时对果蝇的LT为30.19h。[结论]无患子皂苷可以作为植物源农药的材料而开发利用。     

转LdOA1基因果蝇品系GSTs基因表达及对溴氰菊酯胁迫响应

舞毒蛾是重要林业食叶害虫,揭示其G蛋白偶联受体介导G蛋白对GSTs的调控,这对于挖掘分子靶标开发新型杀虫剂具有重要意义。本文构建转LdOA1基因果蝇载体,获得表达LdOA1基因果蝇品系,分析了转基因果蝇GSTs基因表达量及对溴氰菊酯胁迫的响应,为明确昆虫OA1基因功能提供理论依据。通过传统的酶切-连接方法构建重组载体pUAST-attB-LdOA1,采用转基因技术构建表达LdOA1基因的纯合果蝇品系,利用PCR技术验证转基因果蝇品系,并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定转基因果蝇GSTs Delta家族基因表达量及低浓度溴氰菊酯胁迫对GSTs基因表达量的影响。PCR扩增条带显示转LdOA1基因果蝇品系均能检测到453bp目的基因条带。与非转基因果蝇相比,转LdOA1基因果蝇品系中GSTs Delta家族基因(除GSTd4和GSTd7)均上调表达,为非转基因组1.01~3.27倍。低浓度溴氰菊酯胁迫6h,非转基因果蝇GSTd6和GSTd10基因被显著诱导激活,而其他GSTs基因被显著抑制,抑制率为6.48%~95.84%,胁迫12~72h,GSTs基因(除GSTd1和GSTd10外)均被显著抑制。低浓度溴氰菊酯胁迫转基因果蝇GSTs表达量变化趋势与非转基因果蝇基本一致,但转基因果蝇品系GSTs表达量显著高于非转基因果蝇品系(除12~48h GSTd1和GSTd10),且胁迫6h表达量最大。这些结果表明LdOA1基因可能介导G蛋白信号通路调控下游GSTs Delta亚家族基因表达响应溴氰菊酯胁迫。      

紫外线对雄果蝇寿命及子代生理的影响

用不同时间的紫外线辐照(5,15,30min)处理羽化后8h雄果蝇,分别测定雄蝇寿命和繁殖力,再将雄果蝇与同期收集的未经辐照处女果蝇进行交配,统计其后代的畸形个体数量。结果表明,辐照处理后,各处理组果蝇的平均寿命、最高寿命及半数死亡时间均显著缩短(P<0.05),但各辐射组之间的寿命变化差异不显著。各辐照组与对照组相比,后代成虫数显著减少(P<0.05),各辐照组之间差异显著(P<0.05)。辐照组的F1代出现少量畸形个体。     

拟果蝇钠离子通道基因克隆及其生物信息学分析

本文采用RT-PCR技术克隆获得了拟果蝇Drosophila simulans电压门控钠离子通道基因序列,明确其典型特征,分析了进化关系,为拟果蝇抗性分子机理研究奠定基础。克隆得到拟果蝇钠离子通道开放阅读框（GenBank登录号为MT113357）,长为6270 bp,编码2090个氨基酸。通过生物信息学分析,发现拟果蝇与黑腹果蝇Drosophila melanogaster钠离子通道基因相似度高达96.86%,与家蝇Musca domestica钠离子通道基因相似度达88.75%,在进化起源上与双翅目果蝇属昆虫有极高的相似度。所克隆出的序列符合昆虫钠离子通道的基本特征,具有DEKA模块和疏水性失活闸门MFM。获得三个选择性剪接（i、a、b）和17个RNA编辑。本文成功克隆拟果蝇钠离子通道基因,对拟果蝇钠离子通道基因进行分析,为研究其抗性机理奠定基础,为农业生产新型药剂的开发提供了新思路。     

杨梅果蝇引诱剂的初筛

    运用正交实验设计原理,在风洞中模拟自然环境条件,以黑腹果蝇为试虫,筛选杨梅果蝇引诱剂.结果表明,香蕉诱剂和糖醋诱剂对黑腹果蝇成虫都具有明显的诱杀效果,其中香蕉诱剂配方(香蕉肉∶琼脂水∶蜂蜜∶醋的比例为100∶100∶30∶10)和糖醋诱剂配方(红糖∶琼脂水∶白酒∶醋的比例为35∶100∶30∶50)的诱杀效果比其他配方更好,平均诱杀效果分别可达77.79%和94.78%.这2种配方间存在显著差异,糖醋诱剂的诱杀效果显著高于香蕉诱剂.     

三种紫外线辐照对黑腹果蝇蛹的影响

分别利用三种紫外灯（UVA、UVB、UVC）辐照黑腹果蝇蛹，研究辐照对黑腹果蝇的羽化率、性比、飞出率、死蛹率、成虫干重、蛹重以及F1羽化率、F1性比、F1死蛹率、F1成虫干重的影响。结果表明：辐照后黑腹果蝇羽化率均显著降低，其中UVB辐照6 h后的黑腹果蝇蛹羽化率最低，为10.00%；经过UVA辐照9 h组的性比平均值为2.32，显著高于其他处理组；经过UVB辐照后，黑腹果蝇飞出率显著降低，其中UVB处理6 h后黑腹果蝇飞出率低至4.00%；经过UVB辐照的死蛹率显著高于对照组和其他组，其中辐照6 h组黑腹果蝇蛹的死亡率平均值达到89.33%，最高达94.00%。经过紫外线辐照后各组蛹重与对照组相比都有不同程度的增加，且差异显著；经过UVB、UVC辐照后羽化的黑腹果蝇成虫干重显著低于对照组；经过紫外线辐照后黑腹果蝇F1成虫干重相比对照组均有所降低，与对照组差异显著。本研究可为昆虫的紫外线诱变和害虫生物防治提供参考。     

两种昆虫生长调节剂对黑腹果蝇和斑翅果蝇的生物活性

为探讨昆虫生长调节剂氟铃脲和虱螨脲对黑腹果蝇Drosophila melanogaster和斑翅果蝇D.suzukii的毒性机制,采用室内生测法测定氟铃脲、虱螨脲对2种果蝇2龄幼虫的毒力,以及其在亚致死浓度LC_(10)、LC_(20)下对2种果蝇体内几丁质酶活性的影响。结果显示,经不同浓度的氟铃脲和虱螨脲处理后,随着时间的延长和浓度的增加,2种果蝇的死亡率均明显增加,氟铃脲处理可使2种果蝇的死亡率最高达到83.33%,明显高于虱螨脲处理后黑腹果蝇(65.00%)和斑翅果蝇(66.66%)的死亡率。亚致死浓度LC_(10)和LC_(20)的虱螨脲处理果蝇2龄幼虫24 h后,黑腹果蝇2龄幼虫体内的几丁质酶活性呈下降趋势,而斑翅果蝇2龄幼虫体内的几丁质酶活性则呈上升趋势。另外,亚致死浓度的氟铃脲可明显抑制黑腹果蝇体内几丁质酶的活性。表明昆虫生长调节剂氟铃脲和虱螨脲对果蝇有较强的毒力,氟铃脲的毒力高于虱螨脲,且果蝇体内几丁质酶的活性与氟铃脲和虱螨脲密切相关。     

黑腹果蝇抗真菌肽基因Drs和Drs-lC在原核中的表达及抗菌活性的初步测定

对黑腹果蝇(Drosophila m elanogaster)抗真菌肽基因Drs和它的同系物基因Drs-lC在pET-21d载体中与T7.Tag标签序列进行了融合表达,并对融合表达产物进行Xa因子切割前后的抗菌活性测定。首先通过长引物PCR获得5′端带有Xa因子识别切割序列的Drs和Drs-lC,分别克隆至pET-21d表达载体上,然后转化E.coliO rigam i(DE3),筛选得到阳性克隆。以IPTG诱导目的基因与载体上的T7.Tag标签序列融合表达,将表达产物进行初步纯化后,以Xa因子进行切割处理,然后测定处理前后样品的抗菌活性。结果显示与T7.Tag标签序列融合表达的D rs、D rs-lC样品和经Xa因子切割后的样品对供试真菌黄色镰刀菌(Fusarium culm orum)、尖孢镰孢菌(Fusarium oxs-porum)和粗糙脉孢菌(Neuropora crassa)均有明显的抑制作用。